EU's nye told på en række amerikanske varer som eksempelvis Levi's-jeans, bourbon og Harley Davidson-motorcykler trådte i kraft klokken 00 natten til fredag.
Det fremgår af EU's officielle journaler.
De nye toldsatser vil skabe yderligere uro på aktiemarkederne, der allerede er rystede over eskalerende spændinger mellem USA og Kina.
Toldmyndigheder over hele Europa vil nu indføre toldsatserne, hvilket vil få priserne på amerikanske varer til at stige for EU's 500 millioner indbyggere.
Den nye told fra EU er en gengældelsesaktion, efter at USA's præsident, Donald Trump, har indført told på europæisk stål og aluminium.
EU's handelskommissær, Cecilia Malmström, sagde tidligere på ugen, at unionen er tvunget til at reagere på USA's "unilaterale og uberettigede beslutning".
Handelsstriden har udløst dybe panderynker på aktiemarkederne i hele verden, hvor eksperter ikke længere er bange for at tale om en åben handelskrig.
- Vi har en handelskrig, og det er en eskalerende handelskrig, siger cheføkonom ved den svenske storbank SEB Robert Bergqvist.
Ud over cowboybukser, motorcykler og alkohol bliver fødevareprodukter som tranebær, appelsinjuice, majs og jordnøddesmør også omfattet af EU's nye told.
Listen indeholder også stof- og lædervarer samt kosmetikvarer og stålprodukter.
EU-Kommissionens formand, Jean-Claude Juncker, sagde torsdag, at USA's beslutning om at angribe unionen med nye toldsatser "strider imod al logik og historie".
- Vores reaktion skal være klar, men afmålt. Vi vil gøre, hvad der er nødvendigt for at skabe balance, sagde han.
EU har målrettet den nye told mod amerikanske varer, som europæiske forbrugere kan erstatte med varer fra andre lande.
- Hvis vi har valgt produkter som Harley Davidson, jordnøddesmør og bourbon, så er det fordi, der er alternativer på markedet. Vi vil ikke gøre noget, der går ud over forbrugerne, siger Jyrki Katainen, EU's næstformand på handelsområdet.
/ritzau/AFP